Pemanfaatan bakteri sebagai probiotik dalam budidaya udang windu merupakan salah satu upaya preventif yang efektif untuk mengurangi risiko serangan penyakit. Penelitian ini bertujuan untuk membandingkan efektivitas bakteri Bacillus subtilis dan Lactobacillus acidophilus dalam menghambat infeksi bakteri patogen Vibrio parahaemolyticus pada udang windu (Penaeus monodon). Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Januari hingga Maret 2025 di Laboratorium Biologi Perikanan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Borneo Tarakan. Rancangan penelitian yang digunakan adalah Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan pengujian secara in vitro dan in vivo. Konsentrasi bakteri yang digunakan dalam kedua pengujian tersebut adalah B. subtilis dan L. acidophilus masing-masing sebesar 10^8 CFU/mL, serta V. parahaemolyticus sebanyak 10^4 CFU/mL. Parameter yang diamati meliputi kemampuan daya hambat B. subtilis dan L. acidophilus, kelangsungan hidup, pola kematian, rata-rata waktu kematian (RWK), Relative Percentage Survival (RPS), kelimpahan bakteri, dan gejala klinis. Hasil uji in vitro menunjukkan bahwa L. acidophilus memiliki daya hambat yang lebih besar terhadap V. parahaemolyticus dengan rata-rata zona hambat sebesar 7,07 mm ± 4,94, dibandingkan B. subtilis yang hanya menghasilkan rata-rata zona hambat sebesar 2,18 mm ± 0,92. Data in vitro tersebut sejalan dengan hasil uji in vivo, di mana perlakuan L. acidophilus menunjukkan tingkat kelangsungan hidup tertinggi, yaitu sebesar 69,67% ± 15,50, diikuti oleh perlakuan B. subtilis sebesar 43,00% ± 5,00. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa L. acidophilus memiliki potensi lebih besar sebagai agen probiotik untuk meningkatkan ketahanan udang terhadap infeksi V. parahaemolyticus. Kata kunci: efektivitas, daya hambat, B. subtilis, L. acidophilus, V. parahaemolyticus, udang windu (Penaeus monodon).

The utilization of bacteria as probiotics in black tiger shrimp farming is an effective preventive measure to reduce the risk of disease attacks. This study aimed to compare the effectiveness of Bacillus subtilis and Lactobacillus acidophilus in inhibiting the infection of the pathogenic bacteria Vibrio parahaemolyticus in black tiger prawns (Penaeus monodon). This research was conducted from January to March 2025 ath the Fishery Biology Laboratory, Faculty of Fisheries and Marine Sciences, Universitas Borneo Tarakan. The research design used a Completely Random Design (CRD) with testing conducted both in vitro and in vivo. The concentrations of the bacteria used in both test were B. subtilis and L. acidophilus at 10^8 CFU/mL each, along with V. parahaemolyticus at 10^4 CFU/mL.. The parameters observed included the inhibitory ability of B. subtilis and L. acidophilus, survival rate, death patterns, mean time to death (MTD), relative percentage survival (RPS), bacterial abundance, and clinical symptoms. The test result in vitro showed that L. acidophilus had a greater inhibitory effect against V. parahaemolyticus with an average inhibition zone 7,07 mm ± 4,94, compared to B. subtilis which only produced an average inhibition zone of 2,18 mm ± 0,92. This in vitro data aligns with the in vivo results, where the treatment with L. acidophilus showed that highest survival rate of 69,67% ± 15,50, followed by the treatment with B. subtilis at 43,00% ± 5,00. The findings indicated that L.acidophilus has a greater potential as a probiotic agent to enhance the resistance of prawns against V. parahaemolyticus infection. Keywords: effectiveness, inhibitory activity, B. subtilis, L. acidophilus, V. parahaemolyticus, black tiger prawns (Penaeus monodon)